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什么是酶標(biāo)儀?它的用途是什么?工作原理是什么?

作者:酶標(biāo)儀    時(shí)間:2023-12-28 11:31:22    點(diǎn)擊次數(shù):613
 

  酶標(biāo)儀(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù),用于檢測(cè)和測(cè)量樣品中的特定物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、抗原、抗體等)的存在和濃度。它的用途廣泛,包括醫(yī)學(xué)診斷、生物學(xué)研究、食品安全監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。

酶標(biāo)儀

  酶標(biāo)儀的工作原理基于酶的催化作用和免疫反應(yīng)原理。下面是酶標(biāo)儀的基本工作原理:


  1. 固定:首先,在試驗(yàn)板或試管的表面上涂覆目標(biāo)物質(zhì)(如抗原或抗體)。這樣,當(dāng)樣品中的特定物質(zhì)與其相結(jié)合時(shí),它們將被固定在試驗(yàn)板或試管的特定位置上。


  2. 結(jié)合:接下來(lái),將待測(cè)樣品加入試驗(yàn)板或試管中,樣品中的特定物質(zhì)(如抗體)與固定在試驗(yàn)板上的目標(biāo)物質(zhì)(如抗原)發(fā)生特異性的結(jié)合。


  3. 洗滌:為了去除未結(jié)合的物質(zhì),需要進(jìn)行洗滌步驟。洗滌液通過(guò)試驗(yàn)板或試管,將未結(jié)合的物質(zhì)洗掉,只留下特異性結(jié)合的物質(zhì)。


  4. 檢測(cè):然后,加入與待測(cè)物質(zhì)特異性結(jié)合的酶標(biāo)記反應(yīng)物(如辣根過(guò)氧化物酶-HRP),它與特異性結(jié)合的物質(zhì)結(jié)合在一起。


  5. 底物添加:加入底物,底物被酶標(biāo)記反應(yīng)物催化,產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)。常見的底物是類似于四氫吡啶-2-酮(TMB)的物質(zhì),它與HRP催化反應(yīng)后會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色或黃色的產(chǎn)物。


  6. 反應(yīng)停止:在發(fā)生足夠的顏色反應(yīng)后,通過(guò)添加停止液(如硫酸或酸性溶液)停止酶催化反應(yīng)。


  7. 讀取:*后,使用酶標(biāo)儀測(cè)量反應(yīng)產(chǎn)物的光密度或顏色。光密度或顏色的強(qiáng)度與待測(cè)物質(zhì)的濃度成正比,通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,可以確定待測(cè)樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。


  總結(jié)起來(lái),酶標(biāo)儀通過(guò)特異性結(jié)合、酶催化和光密度或顏色測(cè)量等步驟,實(shí)現(xiàn)了對(duì)待測(cè)物質(zhì)的檢測(cè)和測(cè)量。它的工作原理簡(jiǎn)單而靈敏,使其成為許多生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。


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